克里米亚-刚果出血热研究状况与进展

克里米亚-刚果出血热（Crimean Congo hemorrhagic fever，CCHF）（在中国称新疆出血热）因感染CCHF病毒引起，是中国目前已经发现的4种虫媒病毒性传染病之一。CCHF病毒经蜱传播，是自然界中尚未引起人们注意的在蜱→非人类脊椎动物→蜱之间循环的地方性动物传染病。人被带病毒蜱叮咬、接触感染动物内脏和皮毛、密切接触患者及其分泌物和排泄物等而感染本病。临床表现除具有一般病毒性出血热的基本特点外，以消化道出血、鼻腔出血、皮肤黏膜出血点和出血斑为特征。有关CCHF病毒的传播和致病机理及其基因结构和遗传变异的研究，使本病的病原特点、传播和流行分布得到进一步阐明。     

狂犬病病毒致病机制研究概况

狂犬病病毒（RV）是一种高度嗜神经性病毒，由RV引发的狂犬病通常是一种急性致死性神经系统损伤性疾病。RV通过周围神经末梢和中枢神经系统（CNS）的神经元进行病毒的复制和传播。绝大多数狂犬病例CNS病理学表现为急性脑脊髓炎，常常没有显著的显微镜下改变，脑部可以轻度肿胀，脑膜和脑实质血管轻度充血并伴有少量炎症细胞浸润，这也是其他急性病毒性脑炎常见的共同表现。     

甲型H1N1流感若干共同关注的问题

今年3月18日,墨西哥首次报道了人感染甲型H1N1流感病毒,很快这种疾病就从美国与墨西哥交界处往世界蔓延,全球立刻拉响了甲型H1N1流感警钟[甲型H1N1流感,原称人感染猪流感,WHO于2009年4月30日更名为A(H1N1)流感,我国相继更名为甲型H1N1流感].     

帕金森病相关蛋白α-共核蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备

目的 利用分子克隆接术在愿核细胞中表达α-共核蛋白（SNCP），并制备免多克隆抗体。方法 从人神母经细胞SH-SY5Y细胞中提取总RNA，逆转录成cDNA。利用PCR技术扩增获得SNCP的cDNA序列，测序正确后克隆至pQE-30-GST表达载体上，在大肠埃希菌中表达GST-SNCP融合蛋白。融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔，制备特异性抗血清，并对该抗体进行检测。结果 琼脂糖凝胶电泳显示获得SNCP cD-NA序列为420bp。SDS-PAGE和Western blot分析，表达的融合蛋白呈可溶性，相对分子质量约为45000。以其为抗原制备的SNCP抗血清的ELISA效价达到1：32000，并且该抗体可与BALB/c小鼠脑组织中内源性SNCP发生特异性反应。结论 人SNCP可在原核细胞中可溶性表达。用表达的蛋白制备获得特异性较好的SNCP抗血清，为进一步了解SCNP的结构和功能以及在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础。     

中国2000～2001年流行性感冒流行概况

目的：了解中国2000－2001年流行性感冒（流感）流行及抗原性变异情况。方法：鸡胚传代病毒用于抗原分析；病毒液提取RNA进行逆转录－聚合酶链反应（RT－CR），扩增产物纯化后测序。然后用MegAlign(Version1.03）和Editseq（Version3．69）软件进行基因种系发生树分析。结果：2001年流行的H1N1亚型病毒血凝素蛋白重链（H1N1）相比，在抗原决定簇D区的190位发生了氨基酸替换；基因种系发生树表明2001年的H1N1亚型流感病毒存在基因特性不同的两系病病毒株，国内人群中仍然同时流行着两种抗原性明显不同的B型流感病毒（Yamagata系和Victoria系），Yamagata系病毒占大多数，Version系的HA1区基因与B／山东／7／97毒株相比，其197和199位氨基酸发生了替换。B型的基因种系发生树也证实Version系病毒株的抗原性改变。2000年分离的H3N2亚型流感病毒的HA1区氨基酸序列与A／悉尼／5／97（H3N2）间有7－8个氨基酸的差异；2001年分离的H3N2病毒株与2000年的病毒株相比，又有83、186、202、222位发生了氨基酸替换，表明H3N2亚型病毒株间的抗原性发生了较明显的变异。结论：2000－2001年中国流感的流行情况较为平静；H3N2亚型的抗原性发生了变异，H1N1亚型和B型病毒的抗原性虽没有发生明显的变异，但它们均同时流行着两系抗原性不同的毒株。     

RNA病毒的RNA聚合酶研究进展

自然界仅有RNA病毒以RNA作为基因载体.依赖于RNA的RNA聚合酶(RdRp)在这种病毒的增殖复制期起到了非常重要的作用,它一方面以病毒RNA为模板复制子代病毒的基因,另一方面也将病毒增殖期间需要的蛋白质和酶类的基因转录成为mRNA,所以它担负了复制酶和转录酶双重功能.由于酶的结构复杂,稳定性差,在分子水平对它进行分析存在许多困难.人类和动物的许多严重疾病是由RNA病毒引起的,如人的SARS、流感、甲肝、丙肝、艾滋病、麻疹、出血热、脑炎、脊灰、某些肿瘤;动物的口蹄疫、猪瘟、鸡瘟等等.RNA病毒不仅严重威胁人类健康,也给工农业生产带来巨大损失,因此加强RNA病毒研究不仅是开启生命起源神秘大门的钥匙,也是保护人类健康,促进农业生产和生物多样性研究与保护的重要途径.本文仅就RNA病毒的RNA聚合酶以及反向遗传学这两个方面的研究进展做一简单介绍.     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白特异性单克隆抗体(McAb)，为SARS的快速诊断及致病机制的研究提供实验材料。方法 用纯化的重组SARS-CoVN蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合和亚克隆后获得分泌针对N蛋白的杂交瘤细胞株，用Western blot和间接免疫荧光法检测这些细胞株分泌的单克隆抗体特异性，并将N蛋白分3段表达初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。结果 通过细胞融合和3轮克隆化，筛选出分泌抗N蛋白的6个杂交瘤细胞株。Western blot及免疫荧光显示，获得的McAb可与SARS-CoVN蛋白及SARS-CoV发生特异性反应，有4个细胞株分泌的抗体的识别位点位于N蛋白N端，2个位于C端。结论 获得了SARS-CoV特异性单克隆抗体并进行了初步定位，可用于SARS的早期诊断及致病机制研究。     

人白细胞介素12在哺乳动物细胞中的稳定表达及其生物活性的研究

目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切入位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×103左右的糖蛋白。结论本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增殖能力。     

重组风疹病毒外膜蛋白E1的表达及其在血清学中的初步应用

目的 在大肠埃希菌中表达重组风疹病毒外膜蛋白E1,用其作为包被抗原,建立一种用于诊断风疹病毒感染的ELISA检测方法 .方法 通过基因重组的方式构建表达质粒并在大肠埃希菌中表达风疹病毒外膜蛋白E1,蛋白纯化后作为包被抗原,用ELISA的方法 检测世界卫生组织(WHO)的风疹检测质控血清以及来自广西桂林的未知血清样本.结果 采用WHO用于风疹检测的质控血清对所表达的重组抗原的抗原性进行鉴定,通过试验,特异性、敏感性均为100%.用表达的抗原对来自我国广西的200份未知血清样本进行风疹病毒外膜蛋白抗体的检测,阳性率为93%,与文献报道的我国其他地区风疹病毒抗体阳性率基本一致.结论 通过实验我们表达了具有良好抗原性的风疹病毒外膜蛋白E1,为进一步研究风疹病毒感染的实验室诊断技术奠定了基础.     

新疆出血热病毒核蛋白基因的高效表达及其在诊断中的初步应用

目的　克隆并测定了克里米亚 刚果出血热病毒 (CCHFV)中国分离株 (新疆出血热病毒 ,XHFV)BA8816 6株核蛋白 (NP)基因的序列并实现其在细菌中的高效表达与临床诊断的应用。方法　病毒RNA经RT PCR扩增出完整的NP基因。将扩增产物进行序列分析并克隆至融合表达载体pET32a ,使重组质粒在大肠杆菌BL 2 1中高效表达。将融合蛋白经初步纯化后包被ELISA板用于抗体检测。结果　XHFVBA8816 6株NP基因序列以及推导的氨基酸序列与其它XHFV的NP基因和蛋白序列同源性较高 ,在进化树上形成独立的分支。BA8816 6株NP基因编码 4 82个氨基酸的核蛋白 ,推测的相对分子质量 (Mr)约为 5 4× 10 3。在细菌中表达的融合蛋白经印迹试验证明具有良好的抗原性。以所建立的ELISA方法检测疫区人和动物血清的结果与IFA一致 ,并与临床诊断有很好的符合率。结论　BA8816 6株与其它XHFVBA6 6 0 19、BA84 0 2的NP基因在进化上关系密切 ,综合M基因的序列分析结果 ,人源分离株BA8816 6可能是来自蜱的BA84 0 2变异株。表达于细菌中的核蛋白可作为安全的诊断性抗原用于临床检测及流行病学调查 ,所建立的方法准确、特异、简便、快速